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Rose Byrne apareció por primera vez en la gran pantalla cuando tenía 15 años, en Dallas Doll. A partir de entonces se hizo popular en Australia a través de la televisión. Luego se trasladó a Los Ángeles para hacer carrera como actriz de cine. Empezó con Two Hands (1999), junto a Heath Ledger, para después ganar un premio en el Festival de Venecia por su trabajo en The Goddess of 1967.

En ese momento empezaron a llegar ofertas suculentas para Byrne, incluyendo un papel en el Episodio II de La guerra de las galaxias. Durante el rodaje de Obsesión (2004) se enteró de que buscaban a alguien para trabajar en Troya junto a Brad Pitt; se apuntó al casting, convenció a director y productores, y se hizo con el puesto.

Tras rodar Maria Antonieta (2006) con Sofia Coppola, la actriz halló hueco en la nave espacial de Sunshine y en la terrorífica 28 semanas después. Actualmente vive entre Londres y Sydney, y dice sentirse afortunada por el impulso que ha tomado su carrera: "Creo que pertenezco a ese grupo de chicas a las que ofrecen los papeles que rechazan Scarlett Johansson o Keira Knightley. Y, pese a ello, soy feliz. Trabajar como actriz es algo increíble, sobre todo porque el 99 por ciento de los actores están en paro".